TLC (Thin Layer Chromatography) 활용 실험 프로토콜

1. 준비물 

  •  TLC 판 (보통 실리카겔이 코팅된 알루미늄 또는 유리 판)

  •  모세관 (spotting에 사용) 

  •  전개 용매 (예: 에틸 아세테이트/헥산 혼합물) 

  •  전개 챔버 (뚜껑이 있는 비커) 

  •  UV 램프 또는 스프레이 시약 (TLC 결과 확인)

 

 

 

2. 실험 과정 

 

 1. TLC 판 준비:

 

     o TLC 판의 아래 부분에서 약 1 cm 위에 연필로 시작선을 그립니다. 

        (이 선은 샘플을 점적할 위치임) 

     o 샘플을 점적할 위치들을 연필로 표시합니다. 각 위치 간의 거리를 충분히 확보해줍니다.

 

                 

 

 

 

 2. 샘플 점적

     o 모세관을 사용하여 반응 중인 샘플을 소량 취해 각 표시 위치에 점적합니다. 

        점적의 크기는 작고 농축되어야 좋은 결과를 얻을 수 있습니다.

 

 

3. 전개 용매 준비:

     o 전개 용매를 전개 챔버에 부어줍니다. 

       용매의 높이는 TLC 판의 점적된 샘플보다 낮아야 합니다 (보통 0.5 cm 정도). 

     o 챔버에 뚜껑을 덮고 용매 증기가 채워지도록 몇 분간 기다립니다.

 

                   

 

 

 

4. TLC 판 전개

     o TLC 판을 전개 용매에 세워 넣고 (점적된 부분이 용매에 잠기도록) 뚜껑을 닫습니다. 

     o 용매가 TLC 판을 따라 올라가면서 샘플을 전개합니다. 용매가 TLC 판의 상단에서 약 1 cm 아래까지 도달하면 판을 꺼냅니다.

     o TLC 판을 꺼내어 용매가 증발하도록 말립니다. 

 

 

5. TLC 결과 확인

     o UV 램프를 사용하여 샘플의 위치를 확인하거나, 필요한 경우 스프레이 시약을 사용하여 점을 나타내도록 합니다. 

     o 샘플의 이동 거리를 측정하여 Rf 값을 계산할 수 있습니다. (Rf = 이동한 거리 / 용매 전개 거리)

 

                

 

 

 

3. 결과 분석 및 활용 방법 

  •  반응의 진행 확인: 반응 전, 반응 중, 반응 완료 후의 샘플을 비교하여 반응물이 감소하고 생성물이 증가하는 것을 확인할 수 있습니다.

  •  혼합물의 분리: 서로 다른 물질들이 이동한 거리 차이를 통해 혼합물 내의 성분을 구분할 수 있습니다. 

   •  Rf 값 계산: 각 물질의 Rf 값을 계산하여 혼합물 내 특정 성분을 확인하고 비교할 수 있습니다.

 

 

 

4 주의 사항 

  •  TLC 판에 점적할 때 과도한 양을 사용하면 번져서 분리가 어려워질 수 있으므로 주의합니다. 

  •  전개 용매가 너무 빠르게 증발하지 않도록 전개 챔버의 뚜껑을 잘 닫아줍니다.

 

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