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세포의 동결 보존

세포 배양시 보통 일만개에 한 개의 비율로 돌연변이체가 생기며 장기간에 걸쳐
계대 배양을 계속하게 되면 본래의 세포 집단과는 전혀 다른 세포 집단으로 변할 수 있다.
이러한 유전적 변이를 최소화하고 노화와 형질전환을 방지하는 등 세포주를 안정하게 보존하고
또한 오염에 의한 소실을 방지하기 위해서 세포의 동결 보존은 반드시 필요하다.
세포의 동결 보존시 세포에 내동성을 부여하기 위해서 dimethyl sulfoxide (DMSO) 또는 glycerol을 첨가하는데,
glycerol 보다 DMSO가 더 효과가 있는 것으로 알려져 있으며 5 - 10% 농도로 배양배지에 첨가한 freezing medium을 많이
사용하지만 세포에 따라 농도는 달라질수 있다.
Freezing medium(FM 001-01, FM 001-02)에 포함된 DMSO는 세포에 독성을 나타낼 수 있으므로 동결 조작은 신속하게 해야 한다.
동결 보존할 세포는 보존전에 오염 여부를 확인하여야 하고 대수 증식기(log phase)에 있는 활성적인 세포를 이용하며
고밀도(5X106-1X107 cells/ml)로 저장한다.
동결시 감온 속도는 세포에 따라 다르며 보통 -1°C/min 속도로 동결한다.
Programmed cooler를 이용하거나 또는 솜을 채운 ice box에 저장할 세포가 포함된 vial을 넣고 -70 ~ -90°C의 deep-freezer에
정치한 후 액체 질소로 옮김으로써 동결 보존을 완료할 수 있다.
액체 질소는 증발이 잘 되므로 정기적으로 그 수위를 검사하고 다시 채우는 등의 관리가 필요하다.


Mammalian and Insect cell culture
동물 세포 배양의 역사
세포배양시 필요한 장치
생세포수의 계산
살균용 ethanol의 농도
부착 세포 배양과 부유 세포 배양
세포의 동결 보존
동결 보존된 세포의 배양
세포의 계대배양
세포주(continuous cell lines)
곤충 세포의 배양


Classical Media
Classical Media 종류별 성분 비교
세포 배양 배지의 제조에 사용하는 초순수물
Classical Media 성분
Hanks' salt와 Earle's salt의 차이점
세포 배양 배지에 적용되는 완충 작용
L-Glutamine의 함량이 다른 아미노산보다 높은 이유?
L-Alanyl-L-Glutamine과 L-Glutamine
무균 시험(steriliy test)
내독소 시험(endotoxin test)


Serum-Free and Protein Free Media
Serum-free media와 protein-free media
Serum-free media와 protein-free media의 장점
Serum-free media와 protein-free media의 단점
Serum-free media 또는 protein-free media를 PBMC의 배양
Serum-free hybridoma media 또는 protein-free hybridoma media..
Serum-Free CHO media 또는 protein-free CHO media로의 적응 ..
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혈청의 성분
혈청의 열불활성화 (heat-inactivation)
혈청의 저장
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