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Classical Media 성분

아미노산(amino acids)배양 배지에 포함되는 아미노산은 'essential'과 'non-essential'의 2가지 종류가 있으며, 각각에 포함되는 아미노산은 아래 표에 나타나 있다.
Essential amino acid에는 세포에 의해서 합성되지 않는 아미노산과 cystein과 tyrosin이 포함되어 있다.
배양시 각각의 요구량은 세포의 종류에 따라 다르다. Nonessential amino acid는 세포에 의해 합성된다.
그러나 이들 아미노산을 합성하지 못하거나 합성 속도보다 소모 속도가 더 빠른 일부 세포들을 위해서
배지에 첨가해주기도 한다.
모든 아미노산 농도가 최대 세포 농도와 증식 속도에 영향을 주지만 이중에서 가장 중요한 요소는 L-glutamine이다.
L-glutamine은 단백질 합성뿐만 아니라 D-glucose, pyruvate와 함께 주요한 에너지원으로 알려져 있다.

 

비타민(vitamins)
가장 많이 이용되는 종류는 vitamin B-group (folic acid, biotin, pantothenate 등)이다.
일부배지에는 ascorbic acid (vitamin C)와 a-tocopherol (vitamin E)이 포함되기도 한다.
일반 배지에 첨가되어지는 혈청은 주요한 비타민 원으로 작용한다.
따라서 혈청의 농도가 낮아지거나 제거되어지면 비타민 첨가량을 증가시키거나 새로운 비타민 종류를 첨가해야 한다.
비타민은 대사과정의 보조 인자로 작용하기 때문에 저농도의 비타민은 대사과정을 제한하여 세포 생존과
증식 속도에 영향을 미친다.


이온(ions)
이온은 배지의 삼투압을 결정하며 배지에 사용되는 이온은 Na+, K+, Mg2+, Ca2+, Cl-, SO42-, PO43-, HCO3- 등이다.
Ca2+와 Mg2+는 부착과 cell aggregation의 보조 인자로 작용하기 때문에 부유 세포 배양에서는 감량되어 있다.
부유 세포를 위해서 개발된 RPMI 1640 media에는 Ca2+, Mg2+ 성분이 다른 배지들에 비해 감량되어 있다.


탄수화물(carbohydrate)
대부분의 배지에서는 D-glucose가 L-glutamine과 함께 에너지원으로 작용한다.
D-glucose는 glycolysis를 통해서 pyruvate로 전환되고 pyruvate는 Krebs 회로를 통해서 에너지를 생산하게 된다.
일부 세포주에서는 이 Krebs 회로가 불완전하여 다른 대체 에너지원을 요구하는데, 이때 제일 많이 사용되는 것이 L-glutamine이다.
D-glucose는 D-galactose, D-fructose, D-mannose와 같은 다른 탄수화물로
대체될 수 있는데, 대체된 탄수화물의 사용은 배지내 젖산(lactic acid)의 축적을 방지하여 배지의 산성화를 막을 수 있다.


Phenol Red
배지나 기타 시약에 사용되는 phenol red (phenolfulfonphthalein)는 pH 지시제로 사용된다.
이때 산성 pH에서는 황색, 중성 pH에서는 적색, 염기성 pH에서는 자색을 나타낸다.
그러나 phenol red는 스테로이드 호르몬(steroid hormone)과 유사하여 스테로이드 호르몬과 유사한 반응(steroid-like response)을 유발할 수 있다.
세포 배양시, 특히 mammary tissue 배양시 이러한 스테로이드 호르몬 유사 반응(steroid-like response)를
방지하기 위해서 phenol red가 제거된 배지를 사용하기도 한다.


기타 성분
이외 nucleoside, pyruvate, lipid와 같은 성분들이 첨가되어질 수 있다.
이 성분들은 혈청 농도가 낮아질 때 특히 필요한 성분들이며, 동물 세포의 클로닝을 도와주기도 한다.