Phenol Equilibration
1. -20°C에 보관하고 있는 액상 phenol을 꺼내어 상온으로 항온한다.
2. 68°C 수조에서 phenol을 녹인다.
3. 산화방지제인 hydroxyquinoline을 최종 농도 0.1%가 되게 첨가하고 잘 섞는다.
4. 동량의 0.5 M Tris-Cl buffer (pH 8.0)를 첨가하고 15 분 동안 강하게 교반한다.
5. 교반을 중지하고 두 개의 층으로 분리되면 상층(완충액 층)의 용액을 aspiration으로 최대한 제거한다.
6. 동량의 0.1 M Tris-Cl buffer (pH 8.0)를 첨가하고 15 분 동안 강하게 교반한다.
7. 교반을 중지하고 두 개의 층으로 분리되면 상층(완충액 층)의 용액을 aspiration으로 최대한 제거한 후
pH paper로 하층(phenol 층)의 pH를 측정한다.
8. 하층의 pH가 7.8 이상이 될 때까지 "6." ~ "7." 과정을 반복한다.
9. 하층의 pH가 7.8 이상이 되면 1/10 부피의 0.1 M Tris-Cl buffer (pH 8.0, 0.2% β-mercaptoethanol 포함)를 첨가한다.
10. 차광하여 4°C에서 보관한다.
*Notes : Phenol은 부식성(corrosive)이 매우 강하므로 phenol을 다룰 때는 반드시 비닐장갑, 마스크, 보호용 안경을
착용하고 chemical hood에서 작업한다. 피부에 닿았을 경우에는 충분한 물로 씻어주되 ethanol로 씻지 않는다.
2. 68°C 수조에서 phenol을 녹인다.
3. 산화방지제인 hydroxyquinoline을 최종 농도 0.1%가 되게 첨가하고 잘 섞는다.
4. 동량의 0.5 M Tris-Cl buffer (pH 8.0)를 첨가하고 15 분 동안 강하게 교반한다.
5. 교반을 중지하고 두 개의 층으로 분리되면 상층(완충액 층)의 용액을 aspiration으로 최대한 제거한다.
6. 동량의 0.1 M Tris-Cl buffer (pH 8.0)를 첨가하고 15 분 동안 강하게 교반한다.
7. 교반을 중지하고 두 개의 층으로 분리되면 상층(완충액 층)의 용액을 aspiration으로 최대한 제거한 후
pH paper로 하층(phenol 층)의 pH를 측정한다.
8. 하층의 pH가 7.8 이상이 될 때까지 "6." ~ "7." 과정을 반복한다.
9. 하층의 pH가 7.8 이상이 되면 1/10 부피의 0.1 M Tris-Cl buffer (pH 8.0, 0.2% β-mercaptoethanol 포함)를 첨가한다.
10. 차광하여 4°C에서 보관한다.
*Notes : Phenol은 부식성(corrosive)이 매우 강하므로 phenol을 다룰 때는 반드시 비닐장갑, 마스크, 보호용 안경을
착용하고 chemical hood에서 작업한다. 피부에 닿았을 경우에는 충분한 물로 씻어주되 ethanol로 씻지 않는다.