Freezel 

Cell Freezing medium

Animal origin free
Chemically defined

Protein free

Catalog Number RU 010-01
Storage Temperature 2~8°C

제품설명

세포의 동결 보존은 세포의 유전적 변이를 최소화하고 노화와 형질전환을 방지하는 등 세포주를 안정하게 보존하고 또한 오염에 의한 소실을 방지하기 위해서 반드시 필요한 과정입니다. 

Freezel (RU010-01)은 10% DMSO를 함유하고 있으며 세포를 안전하게 동결 보존할 수 있는 최첨단 동결 보존제로서 세포 치료제 및 유전자 치료 응용 분야에서의 연구를 위해 개발되었습니다. 

또한 동물성 성분이나 단백질, phenol red를 포함하고 있지 않은 화학적으로 정의된 배지로 구성되어 있어 배치 간 변동성을 낮추어 주며, 연구의 일관성과 효율성을 향상시킬 수 있습니다. 

동결 보존할 세포는 보존 전에 오염 여부를 먼저 확인하고, 대수 증식기 (Log phase)에 있는 활동적인 세포를 이용하여 고밀도 (1X 106 ~ 1X 107 cells/ml)로 저장합니다. 

동결 시 감온 속도는 세포에 따라 다르나, 보통 -1°C/min의 속도로 동결합니다. 

Programmed cooler를 사용하거나 또는 isopropanol이 들어간 세포 동결탱크를 사용할 경우, 동결 보존할 세포가 포함된 vial을 먼저 -70 ~ -80°C의 deep-freezer에서 하루 동안 정치한 다음에 액체 질소로 옮김으로써 동결 보존을 완료할 수 있습니다. 

액체 질소는 증발이 잘 일어나므로 정기적으로 그 수위를 검사하고 다시 채우는 등의 관리가 필요합니다.

보관 및 안정성 

Freezel은 냉장조건 (2~8°C)에서 보관하여야 합니다. 

Freezel의 변성은 (1) 침전물 또는 부유물, (2) 용액의 탁해짐, (3) 색의 변화, 그리고 (4) pH의 변화 등으로 나타날 수 있습니다. 

추가로 첨가하는 첨가제의 성질에 의해 보관조건 및 배지의 유효 기간이 바뀔 수도 있습니다. 유효기간은 제품 라벨에 표시 되어 있습니다. 

생물학적 특성 

Freezel의 생물학적 특성은 세포 동결 보존 후 다시 해동하여 특성을 파악합니다. 

먼저, 성장 속도는 세 번의 계대 배양을 통하여 측정하고, 양성대조군에서 배양한 것과 비교합니다. 시험을 진행하면서 현미경으로 세포의 형태 변화와 cytotoxicity의 현상이 나타나는지 주의 깊게 관찰합니다. 

세포의 동결

보존 부착세포의 경우

1.배양 배지를 제거하고 Ca2+와 Mg2+가 없는 DPBS (LB 001-02) 또는 HBSS (LB 003-03, LB 003-04)를 분주해 세포 단층을 씻어 냅니다. 

2. DPBS 또는 HBSS를 제거한 후 Trypsin 또는 Trypsin-EDTA를 처리합니다.

3. Incubator에 넣고 3~5분간 기다려 세포를 탈착시킵니다. 

4. 배양 배지를 분주하여 탈착된 세포를 모은 다음 계수하여 세포수와 세포생존율을 확인합니다. 

5. 1 ml당 5X 105 ~ 1X 107 cells가 되도록 세포를 나눠 담고 원심분리합니다 (2,000 - 3,000 rpm, 2 - 4분).

6. 상층액을 제거한 후 침전된 세포에 Freezel을 첨가하여 부드럽게 pipetting 해줍니다 (5X 105 ~ 1X 107 cells/ml/vial). 

7. 세포 현탁액을 1 ml씩 cryotube에 분주한 후 세포 종류, 세포수, 날짜 등의 정보를 라벨링 해줍니다. 

8. Isopropanol이 들어간 세포 동결탱크에 7의 cryotube를 넣은 후 -80°C deep-freezer에 넣고 -1°C/min 속도로 하루 동안 정치한 다음 액체 질소통으로 옮깁니다.

부유세포의 경우

1.1 ml당 5X 105 ~ 1X 107 cells가 되도록 세포를 나눠 담고 원심분리합니다 (2,000 - 3,000 rpm, 2 - 4분). 

2. 상층액을 제거한 후 침전된 세포에 Freezel을 첨가하여 부드럽게 pipetting 해줍니다 (5X 105 ~ 1X 107 cells/ml/vial). 

3. 세포 현탁액을 1 ml씩 cryotube에 분주한 후 세포 종류, 세포수, 날짜 등의 정보를 라벨링 해줍니다. 

4. Isopropanol이 들어간 세포 동결탱크에 3의 cryotube를 넣은 후 -80°C deep-freezer에 넣고 -1°C/min 속도로 하루 동안 정치한 다음 액체 질소통으로 옮깁니다.

*원심분리 속도는 세포 종류에 따라 달라질 수 있습니다.

동결 보존된 세포의 해동

1. 세포 배양 배지를 37°C 수조에서 약 30분간 미리 데워줍니다. 

2. 동결 보존 세포를 포함한 cryotube를 액체 질소에서 꺼내는 즉시 37°C 항온 수조에서 재빨리 해동시킵니다. 

3. 해동 시킨 세포에 세포 배양 배지를 섞어준 다음 세포를 원심분리합니다 (2,000 - 3,000 rpm, 2 - 4분). 

4. 상층액을 제거한 후 배양 배지를 넣고 부드럽게 pipetting 해줍니다. 

5. 적합한 배양 용기에서 배양합니다. 

6. 현미경으로 세포를 관찰하며 2~3일마다 새로운 배지로 교체해주고 세포가 배양 용기를 꽉 채우게 되면 계대 배양합니다 (부유세포의 경우 원심분리하여 배양액을 버리고 새로운 배지로 세포 침전물을 현탁하여 배양용기에서 배양합니다).

 *원심분리 속도는 세포에 따라 달라질 수 있습니다.

[Welgene AOFㆍCD 동결보존제 종류] 

Precautions

For In Vitro Use Only