DOSPA
N-[2-[[2,5-bis[(3-aminopropyl)amino]-1-oxopentyl]amino]ethyl]-N,N-dimethyl-2,3-bis[(9Z)-9-octadecen-1-yloxy]-1-propanaminium chloride tetrahydrochloride
Catalog Number: CH003-01
Storage Temperature: ≤ -20°C
제품설명
DOSPA는 대표적인 양이온성 지질(Cationic Lipid)로, 음전하를 띠는 DNA, mRNA 및 siRNA 등의 핵산과 안정적인 복합체를 형성하여 세포 내 전달 효율을 향상시키는 데 중요한 역할을 합니다.
본 제품은 고순도 합성 공정을 통해 제조되어 Lot 간 재현성이 우수하며, 다양한 세포주에서 높은 트랜스펙션 효율을 제공합니다.
또한 helper lipid와의 혼합이 용이하여 liposome 및 LNP(Lipid Nanoparticle) 제형 연구에 적합하며, 유전자 전달, 백신 개발 및 nucleic acid delivery 분야에 폭넓게 활용될 수 있는 고품질 지질 솔루션입니다.
보관 및 안정성
본 제품은 고체 형태의 경우 영하 20℃ 이하에서 차광 보관하는 것을 권장합니다.
DOSPA는 다중 양이온성 구조와 불포화 지방산 사슬을 포함하고 있어 산화 및 수분에 민감할 수 있으므로, 공기 및 습기 노출을 최소화하기 위해 질소(N₂) 또는 아르곤(Ar) 가스를 충진한 상태로 밀봉 보관하는 것이 바람직합니다.
유기용매에 용해한 상태에서는 갈색 유리 바이알에 밀폐 보관하고, 장기 보관 시에는 산화 및 분해를 최소화하기 위해 -80℃ 초저온 냉동 보관을 권장합니다.
반복적인 냉동-해동(freeze-thaw)은 지질 구조 변화 및 전달 효율 저하를 유발할 수 있으므로, 실험 목적에 맞춰 소분하여 사용하는 것을 권장합니다.
권장 조건에서 보관 시 제조일 기준 최소 1년 이상의 안정성을 유지할 수 있습니다.
용해 및 사용 시 주의 사항
DOSPA는 클로로포름(Chloroform), 메탄올(Methanol), 에탄올(Ethanol) 등의 유기용매에 용해될 수 있으며, 지질 조성 제조 시 완전한 용해 여부를 반드시 확인해야 합니다.
지질 필름 형성 시에는 질소 또는 아르곤 기류 하에서 유기용매를 천천히 제거하여 균일한 lipid film을 형성하는 것이 중요합니다.
수화(Hydration) 및 nanoparticle 형성 과정에서 과도한 초음파 처리나 강한 물리적 교반은 지질 구조 손상 및 전달 효율 저하를 유발할 수 있으므로 주의해야 합니다.
또한 DOSPA는 다중 양이온성 특성을 가지므로 핵산과 강하게 결합할 수 있으며, 용액 상태에서 표면 흡착 가능성이 있어 저흡착(low-binding) 튜브 사용을 권장합니다.
모든 제조 및 취급 과정은 가능한 무균 환경에서 수행하는 것이 바람직합니다.
주요 응용 분야 및 방법
DOSPA의 대표적인 응용 분야는 mRNA, siRNA 및 plasmid DNA 등의 핵산 전달을 위한 유전자 전달 시스템 개발입니다.
DOSPA는 양이온성 지질로서 음전하를 띠는 핵산과 복합체(Lipoplex)를 형성하여 세포막 통과 및 세포 내 유입을 촉진하며, liposome 및 LNP(Lipid Nanoparticle) 제형의 핵심 구성 성분으로 활용됩니다.
특히 높은 핵산 결합력과 endosomal escape 특성으로 인해 transfection 연구, 유전자 치료제 개발, 백신 전달체 연구 등에 폭넓게 사용됩니다.
사용 시에는 Cholesterol, DOPE, DSPC, PEG-lipid 등의 helper lipid와의 조성 비율을 목적에 맞게 최적화해야 하며, 세포 독성과 전달 효율의 균형을 위해 N/P ratio(질소/인산 비율)를 조절하여 적용하는 것이 중요합니다.
LNP 제형 기본 프로토콜 (Microfluidic 기반)
1) 지질 혼합물 준비
DOSPA, DSPC, Cholesterol 및 PEG-Lipid를 설계된 몰 비율에 따라 혼합한 뒤, 무수 에탄올(Ethanol) 또는 에탄올/클로로포름 혼합용매에 완전히 용해시킵니다.
DOSPA는 다중 양이온성 구조를 가지므로 핵산 결합 효율에 큰 영향을 미치며, helper lipid와의 조성 비율 최적화가 중요합니다.
2) 핵산 용액 준비
mRNA, siRNA 또는 Plasmid DNA를 pH 4.0 수준의 25–50 mM Sodium Acetate Buffer 또는 Citrate Buffer에 용해하여 사용 목적에 맞는 농도로 준비합니다.
산성 조건은 DOSPA의 양이온화를 촉진하여 핵산 캡슐화 효율 향상에 도움을 줍니다.
3) 유입 속도 비율(FRR) 설정
일반적으로 수용상(Aqueous phase) : 유기상(Organic phase) 비율은 3:1 또는 4:1 조건이 널리 사용됩니다.
총 유속(TFR)을 조절하여 입자 크기 및 PDI(Polydispersity Index)를 최적화할 수 있으며, 목적에 따라 50-150 nm 수준의 입자 형성이 가능합니다.
4) Microfluidic 장비 사용
NanoAssemblr(Precision Nanosystems) 또는 자체 제작된 Microfluidic Chip 시스템을 이용하여 지질과 핵산 용액을 빠르게 혼합함으로써 균일한 LNP를 형성합니다.
혼합 직후에는 자발적으로 nanoparticle self-assembly가 진행됩니다.
5) 후처리 및 Buffer Exchange
제조된 LNP는 Dialysis, Ultrafiltration 또는 Tangential Flow Filtration(TFF)을 이용하여 잔류 유기용매 및 비캡슐화 핵산을 제거합니다.
이후 PBS(pH 7.4) 또는 HEPES Buffer로 buffer exchange를 수행하여 생리학적 안정성을 확보합니다.
6) 품질 평가 및 최적화
최종 제조된 LNP는 Dynamic Light Scattering(DLS)을 통해 입자 크기와 PDI를 분석하며, Zeta Potential 및 Encapsulation Efficiency 측정을 통해 전달 효율을 평가합니다.
세포 독성 감소 및 전달 효율 향상을 위해 DOSPA 비율과 N/P Ratio를 실험 목적에 맞게 최적화하는 과정이 필요합니다.
