TOM^TM  Transfection Optimized Medium, Liquid

Endotoxin test

Performance test

Sterility test

Serum-free medium for transfection

Catalog Number TR 004-01

Storage Temperature 2~8°C

Product Description

Transfection Optimized Medium 은 WelFect^TM  transfection reagent 시리즈에 최적의 무 혈청 환경을 제공합니다. 배지의 풍부한 영양분은 세포 유지를 지원하고 효과적으로 세포 생존 능력을 증가시킵니다.

Storage/Stability

Transfection Optimized Medium 은 차광하여 2~8°C에서 보관하여야 한다. 액상 배지의 변성은 (1) 침전물 또는 부유물, (2) 용액의 탁해짐, (3) 색의 변화, 그리고 (4) pH의 변화 등으로 나타날 수 있다. 추가로 첨가하는 첨가제의 성질에 의해 보관조건 및 배지의 유효기간이 바뀔 수 있다. 유효기간은 제품 label에 표시 되어있다.

Instructions for Use

Transfection Optimized Medium 은 사용하기 전에 (1) 각 유전자 발현 시스템에 따라 영양 요구 조건을 변경할 필요성이 있고, (2) 재조합 단백질의 발현을 증가시키기 위하여 polyamine (LS 018-01), fatty acid (LS 017-01), sodium butyrate (LS 033-01)를 첨가하는 것이 바람직하며, (3) CO2 incubator에서 배양하기 위해서는 NaHCO3농도를 조정하여 배양 중의 pH를 조절하는 것이 바람직하고, (4) spinner flask 를 사용할 때, 통풍이 가능하도록 덮개를 1/4 정도 열어 두어야 한다.

Biological Performance Characteristics

Transfection Optimized Medium 의 growth-promoting capacities는 액상 배지에 hybridoma 세포주를 배양하면서 테스트한다. Growth rates은 세 번의 계대배양을 통하여 측정한다. 시간에 따른 세포수의 변화를 측정하고 seeding efficiencies, doubling time, 그리고 final cell densities를 결정한다. 배양 기간 동안 typical morphology 및 evidence of cytotoxicity 대해 현미경으로 관찰하며 검사한다.

Precautions

Transfection Optimized Medium은 In Vitro 에만 사용하며, 빛과 열에 불안정 하므로 (1) 빛에 가능한 노출을 하지 않고, (2) 37°C로 배지를 항온하는 시간을 단축하고, (3) 작업 후 바로 냉장고 (암실)에 보관하며, (4) 가능한 작업에 필요한 양만 꺼내어 사용한다.

Protocols

- WelFect^TM  transfection reagent 시리즈를 적용한 24 well plate 사용 기준으로 작성되었습니다.

- 기본적으로 일반적인 transfection protocol과 동일합니다.

- 보다 정확한 transfection을 위해서 혼합 시 polystyrene계 tube를 사용하시고 최대한 tube의 기벽에 묻지 않도록 유의하여 주시기 바랍니다.

- 점착성 (adherent) 세포와 부유성 (suspension) 세포의 경우, 효율적인 transfection을 위해 세포를 준비하는 과정이 다릅니다. 세포의 성장 형태에 따라서 방법을 구분하여 설명하였습니다.

- 점착성의 세포의 경우 <A. Adherent cells> 방법으로, 부유성 세포의 경우 <B. Suspension cells>의 방법으로 할 것을 권장합니다.

1. Adherent cells (점착성 세포)

1. [Cell culture] Transfection 전날 2 ~ 6 x 10⁴ cell/ml로 seeding하여 실험 당일 confluence가 60 ~ 80% 정도가 되도록 배양한다.

2. [Medium Exchange] 실험당일 plate상의 기존 growth medium을 제거하고 혈청과 항생제가 포함되어 있지 않은 serum free medium (TOM medium, PBS도 가능) 등으로 한번 세척한 후, 0.3 ml serum free Transfection Medium (TOM medium, Cat. No.: TR 004-01 사용 권장)으로 교환하여 CO₂ 배양기에 넣어둔다 (* note 1, 2).

*note 1: 민감한 세포주의 경우, medium 교환 없이 다음 과정으로 진행할 수 있으나 transfection 효율이 50% 정도 감소될 수 있음.

*note 2: 일부 serum-free media의 경우 cationic lipid-mediated transfection을 방해할 수도 있으므로 사전 검증이 필요함. TOM medium이나 기존 transfection에 사용하고 있는 serum-free medium이라면 사용해도 무방함.

3. [DNA dilution] 적절한 tube에 전달하고자 하는 DNA (Table 1, 2 참조)를 혈청이 포함되지 않은 50 ml Transfection Medium에 첨가하여 희석한다.

4. [Premixing] Enhance reagent 를 50 ml Transfection Medium에 희석한 후, 미리 희석해 놓은 3번 과정의 DNA 용액에 첨가하여 혼합한 뒤, 상온 (또는 4°C) 에서 10 ~ 15분간 반응시킨다.

*note: DNA size가 크거나 고농도의 DNA를 사용할 경우 4℃에서 반응 시 효율이 증가할 수 있다.

5. [Lipid dilution] Cationic lipid 를 혈청이 포함되지 않은 50 ml Transfection Medium에 첨가하여 희석한다.

6. [Mixing & complex forming] 4 번 과정의 pre-mixing된 용액과 5 번 과정의 cationic lipid 희석액을 혼합한 후, 상온 (또는 4°C) 에서 10 ~ 15 분간 반응시킨다.

*note: DNA size가 크거나 고농도의 DNA를 사용할 경우 4℃에서 반응 시 효율이 증가할 수 있다.

7. [Transfection] 6번 과정의 DNA + Enhance reagent + cationic lipid 최종 혼합액 (약 150 ml)을 각 well에 첨가하고 조심스럽게 혼합한 후, CO₂ 배양기에서 세포를 배양한다.

8. [Cell Culture] 3 ~ 6 시간 후, 각 well에 혈청이 포함된 complete medium으로 교환하거나 추가적으로 첨가한 후, 배양을 계속한다.

*note: 별도의 washing과정 없이 혈청이 포함된 growth medium을 첨가한다.

9. [Assay] Transfection 후, 8 ~ 48 시간 경과 후 추가실험을 진행한다