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곤충 세포의 배양

대부분의 곤충 세포들은 25-30°C에서 증식한다.
배양에 가장 많이 적용되는 pH는 6.0-6.4이며 삼투압은 345-380 mOsm/kg·H2O이다.
곤충세포를 배양할 때, 부착 배양과 35 ml 이하의 부유 배양 동안에는 고습을 유지해야 하며 35 ml
이상의 부유 배양 동안에는 습도가 배양에 큰 영향을 미치지는 않는다.
곤충 세포의 배양과 적용에 또 다른 요건이 되는 것은 충분한 O2 공급이다.
따라서 부착 배양에서 부유 배양으로 전환할때는 최대한의 기체 교환이 원활히 일어날 수 있도록 고려하여야 한다.
부유 배양을 할 때는 mechanical shear force를 발생시킨다.
부유 배양 동안에 세포가 받는 shear stress factor들에는 교반 배양 용기내의 impeller의 크기와
형태, 교반 속도, 공기 공급시 발생하는 거품의 크기와 발생 속도, 표면에서의 소용돌이 등이 포함된다.
대부분의 경우 곤충 세포의 부유 배양 동안에 이러한 shear force를 방지할 필요로 한다.
배지내의 5 - 10% 농도의 혈청이 어느 정도의 shear force를 막아주지만, Pluronic F-68 (LS 105-01)과 같은
shear force 방지제를 사용하는 것이 좋다.
가장 많이 배양되는 Sf9 세포은 Spodoptera frugiperda (fall armyworm) ovary유래의 epitherial cell이다.
Sf9 세포의 배양에는 부착 배양과 부유 배양법의 2가지 모두 적용할 수 있다.
Serum-Free Medium과 Protein-Free Medium을 Insect Cell에 적용할 때, antibiotics나
antimycotics는 사용하지 않는 것이 좋고 만약 반드시 사용해야 한다면 일반 사용량의 50%를 첨가하여 사용한다.
또한 곤충 세포는 혈청이 제거된 조건에서는 용기에 매우 강하게 부착되어 있어 탈착시에 손바닥으로
배양 용기를 치는 등의 과정이 필요하다.
Serum-free media를 곤충 세포에 적용한 후 세포의 증식에는 이상이 없지만 단백질 생성이 감소되는 경우가 있을 수 있다.
목적 단백질이 late phase의 단백질이라면 이러한 현상은 더욱 심화되는데 이것은 세포의 protease때문이다.
혈청이 포함된 배지는 이들 protease가 혈청에 포함된 다른 단백질들에게 분산 작용하여
목적 단백질에 별 영향을 주지 않지만 serum-free media에는 protease의 target이 되는 단백질이 많지 않으므로 protease의 작용이 목적 단백질로 몰리게 된다.
이러한 현상을 막기 위해서 protease inhibitor를 사용하거나 소량의 혈청(1% 이하)을 사용하기도 한다.