동결 보존된 세포의 배양

동결된 세포는 저온과 DMSO에 의한 장해를 피하기 위해서 신속히 조작할 필요가 있다.
액체 질소에 저장 상태인 동결 세포 vial은 액체 질소에서 외부로 나오는 즉시 37 - 40°C 정도의 수조에서 신속히 해동하고, 미리 준비한 배지에 세포 현탁액을 넣는다.
DMSO나 glycerol을 제거하고자 할 경우에는 80 xg에서 2 - 3 분간 원심하여 상청액을 버리고 새로운 배지에 세포를 현탁한 후 배양 용기에서 배양한다.
이때 보통의 계대 배양때보다 높은 세포 접종 밀도로 배양을 시작하고 다음날 반드시 배지 교환을 한다.

부착 세포의 경우(37°C에서 배양하는 세포의 경우)
1 .37°C 수조에서 배지를 미리 항온한다.
2 .동결 보존 세포를 포함한 vial을 액체 질소에서 꺼내는 즉시37°C 항온 수조에서 재빨리 해동시킨다.
3.DMSO나 glycerol을 제거하고자 할 경우에는 80 xg에서 2 - 3분간 원심하여 상청액을 버리고새로운 배지에 세포를 현탁한다. DMSO나 glycerol을 제거하지 않아도 될 경우에는 원심하지 않고 새로운 배지에 세포를 현탁한다.
4 .배양 용기에서 배양한다.
5 .다음날 새로운 배지로 교환한다.
6 .현미경으로 세포를 관찰하며 2 - 3일마다 새로운 배지로 교체해주고 세포가 배양 용기를 꽉 채우게 되면 계대 배양한다.

부유 세포의 경우(37°C에서 배양하는 세포의 경우)
1 .37°C 수조에서 배지를 미리 항온한다.
2 .동결 보존 세포를 포함한 vial을 액체 질소에서 꺼내는 즉시37°C 항온 수조에서 재빨리 해동시킨다.
3 .DMSO나 glycerol을 제거하고자 할 경우에는 80 xg에서 2-3분간 원심하여 상층액을 버리고 새로운 배지에 세포를 현탁한다. DMSO나 glycerol을 제거하지 않아도 될 경우에는 원심하지 않고 새로운 배지에 세포를 현탁한다.
4 .양 용기에서 배양한다.
5 .다음날 새로운 배지로 교환한다. 이때는 원심하여 배양액을 버리고 새로운 배지로 세포 침전을 현탁하여 배양용기에서 배양한다.
6. 현미경으로 세포를 관찰하며 2 - 3일마다 새로운 배지로 교체해주고 세포의 개수를 측정하여 일정 수준 이상이 되면 계대 배양한다.