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세포의 동결 보존

세포 배양시 보통 일만개에 한 개의 비율로 돌연변이체가 생기며 장기간에 걸쳐
계대 배양을 계속하게 되면 본래의 세포 집단과는 전혀 다른 세포 집단으로 변할 수 있다.
이러한 유전적 변이를 최소화하고 노화와 형질전환을 방지하는 등 세포주를 안정하게 보존하고
또한 오염에 의한 소실을 방지하기 위해서 세포의 동결 보존은 반드시 필요하다.
세포의 동결 보존시 세포에 내동성을 부여하기 위해서 dimethyl sulfoxide (DMSO) 또는 glycerol을 첨가하는데,
glycerol 보다 DMSO가 더 효과가 있는 것으로 알려져 있으며 5 - 10% 농도로 배양배지에 첨가한 freezing medium을 많이
사용하지만 세포에 따라 농도는 달라질수 있다.
Freezing medium(FM 001-01, FM 001-02)에 포함된 DMSO는 세포에 독성을 나타낼 수 있으므로 동결 조작은 신속하게 해야 한다.
동결 보존할 세포는 보존전에 오염 여부를 확인하여야 하고 대수 증식기(log phase)에 있는 활성적인 세포를 이용하며 고밀도(5X106-1X107 cells/ml)로 저장한다.
동결시 감온 속도는 세포에 따라 다르며 보통 -1°C/min 속도로 동결한다.
Programmed cooler를 이용하거나 또는 솜을 채운 ice box에 저장할 세포가 포함된 vial을 넣고 -70 ~ -90°C의 deep-freezer에 정치한 후 액체 질소로 옮김으로써 동결 보존을 완료할 수 있다.
액체 질소는 증발이 잘 되므로 정기적으로 그 수위를 검사하고 다시 채우는 등의 관리가 필요하다.