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Newsletter Vol.2024-02 (3)제품 이야기: WelCount™ Cell Proliferation Assay kit

WelCount™ Cell Proliferation Assay kit 

Catalog Number TR 005-01

Storage Temperature -20°C/-70°C

 

Product Description

WelCount ™ Cell Proliferation Assay Kit는 XTT( 2,3-Bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide)를 기반으로 분광 광도계를 이용해 살아있는 세포의 수를 측정할 수 있는 제품으로, WelCount ™ Cell Proliferation Assay Kit를 사용하면 기존 MTT( Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide) 기반 제품 보다 더 편리하게 미토콘드리아 활성을 측정할 수 있습니다.  XTT 시스템은 미토콘드리아 탈수소효소를 검출하여 세포 활성을 측정하며 간단한 과정을 통해 매우 정확한 결과를 얻을 수 있습니다.

< Comparison of sensitivity between XTT and MTT assay >

 

Contents

XTT Reagent  5 ml X 4 ea

1% PMS Reagent   0.1 ml X 1ea

 

Storage/Stability

The reagents are stored at -20°C/-70°C.

 

Precautions

The reagents are filled to an ambor container.

 

Protocols

- XTT, PMS 시약은 빛에 민감하므로 빛에 대한 노출을 최소화하는 것이 좋습니다.

1. [Sample Preparation] 부착세포는 실험 전날 sedding 하고 현탁세포는 시험 직전에 sedding 합니다.

*주의: tetrazolium ring은 박테리아에 의해 파괴되므로 오염에 주의하십시오 .

 

2. [Thawing] XTT PMS 시약은 37℃ water bath 등에서 완전히 해동합니다.

 

3. [Preparation of working solution] XTT 시약 1ml당 PMS 시약 20ul 의 비율로 잘 섞어 working solution을 제조합니다.

* 주의: working solution은 당일 혼합한 신선한 제품을 사용하며, 혼합한 용액은 모두 사용을 권장합니다.

 

4. [Adding & Mixing] 각 well에 배양액 부피의 20%의 working solution을 첨가하고 가볍게 흔들어 섞는다. 예를 들어 배양 배지 용량이 200ul인 경우 working solution 40ul를 추가합니다 .

 

5. [Incubation] 37℃ CO 2 incubator 에서 2~4시간 배양합니다 .

*주의: 세포주 종류나 세포수에 따라 수치가 다를 수 있으므로 2시간과 4시간 측정과 비교하시기 바랍니다.

 

6. [Tapping] 반응이 끝나면 형성된 XTT formazan을 두드려서 잘 혼합합니다.

 

7. [Reading] Plate Reader를 이용하여 흡광도를 측정합니다 .

*참고: 결과 = 450nm에서 측정된 값 – 690nm에서 측정된 값

 

References

Tada, H, et al, (1986), J Immunol Meth 93, 157-165

Scudiero, PA, et al, (1988), Cancer Res 48, 4827-4833

Weislow, OS, et al, (1989), J Natl Cancer Inst 81, 577-586

Hansen, MB, et al, (1989), J Immunol Meth 119, 203-210

Roehm, NW, et al, (1991), J Immunol Meth 142, 257-265

Jost, LM, et al, (1992), J Immunol Meth 147, 153-165

Goodwin, CJ, et al, (1995), J Immunol Meth 179, 95-103

Kairo, SK , et al, (1999), Vaccine 17, 2423-2428